Trái đất

Các nhân viên an ninh (Security Guard)

Là lực lượng bảo vệ riêng của khu phức hợp Black Mesa, mặc đồng phục xanh dương, đội mũ bảo hộ. Là những người giúp nhân vật chính nhiều việc như mở khoá cửa, phối hợp giết quái vật... Trong bản mở rộng Opposing Force có thêm một nhân viên ngoài Barney Calhoun đó là Otis Laurey. Họ thường sử dụng vũ khí là Glock 17 hoặc là Desert Eagle.

Các nhà khoa học (Scientist)

Là những người làm việc, nghiên cứu tại Black Mesa. Khi thảm họa xảy ra, họ cũng như các nhân viên an ninh bị lực lượng HECU thủ tiêu để bịt đầu mối. Một số bị khống chế để sử dụng, điều khiển máy móc. Một số bị Headcrab chụp vào đầu, biến thành zombie. Thỉnh thoảng giúp nhân vật trong một số việc như mở cửa[6]...Trong bản mở rộng Opposing Force, ngoài Scientist ra còn thêm nhân viên nữa là Cleansuit scientist. Họ thường hay xuất hiện với bộ đồ bảo hộ tránh phóng xạ.

HECU (Hazardous Enviroment Combat Unit)

Là lực lượng của chính phủ Hoa Kỳ gửi đến Black Mesa để tiêu diệt quái vật từ Xen và thủ tiêu những người ở đó. Trong bản mở rộng Opposing Force họ là đồng đội của nhân vật chính, thường phối hợp nhiều việc như giết quái vật, mở khóa cửa, hồi máu.....

Có 3 class:

-Medic: có khả năng hồi máu và sử dụng vũ khí là Beretta M9.

-Torch: sử dụng Desert Eagle và có khả năng cắt khóa cửa.

-Grunt: phổ biến, sử dụng các vũ khí như MP5, SPAS-12, M249 Squad Automatic Weapon...

Black Ops Assasin

Là điệp viên CIA mặc bộ đồ đen, có súng lục và di chuyển rất nhanh. Trong bản mở rộng Opposing Force thì những điệp viên Black Ops còn có đàn ông so với bản gốc chỉ có phụ nữ, họ sử dụng MP5, M40A1 Sniper Rifle.

Quái vật từ hành tinh Xen

HeadcrabLà quái vật ký sinh nhỏ, giống cua, 4 chân, xuất hiện nhiều nhất trong game.ZombieLà những nhân vật bị Headcrab chụp vào đầu và điều khiển. Có thể là tiến sĩ, bảo vệ, nhân vật trong HECU,....HoundeyeLà quái vật giống như chó màu vàng, nhiều mắt, 3 chân, xung quanh cột sống là gân điện. Khi "sủa" sẽ tạo nên một dãy âm thanh tần số cao khiến những vật xung quanh bị ảnh hưởng.BullsquidMột quái vật có hai chân thon ngắn, đuôi khỏe, dài, thuôn nhọn lại một điểm. Thường xuất hiện trong hệ thống cống rãnh, bể phóng xạ trong game. Có thể phun chất độc màu vàng rất xa.Vortigaunt (Islave)Một sinh vật hình dạng giống con người, hành tinh của họ bị Combine xâm lược nên chạy trốn đến Xen, có một mắt đỏ. Có thể phóng điện.BarnacleLà những cái lưỡi rất dài, dính vào trần nhà hoặc cầu. Khi có sinh vật bị dính vào lưỡi, nó sẽ kéo lên và "ăn". Nếu bị giết chết, nó sẽ nôn ra các khối xương, thịt của nạn nhân.Alien GruntCó hình dáng của đười ươi, tay nhỏ ở giữa ngực. Đầu, tay, chân được bao bọc bằng hợp kim cứng. Tay có khả năng bắn ra những con bọ bay.Manta RaySinh vật biết bay có hình dáng giống với cá đuối, xuất hiện chủ yếu ở hành tinh Xen, phần bụng có thể phát ra điện xuống mặt đất.Còn có tên gọi khác là Alien Aircraft. Nó xuất hiện ngay ở đầu game và là thủ phạm khiến Goose 3 và Goose7 (chở Shephard) rơi.GargantuaMột con chuột chũi khổng lồ đôi tay cực mạnh, bắn hơi lửa.TentacleLà con bạch tuộc khổng lồ, có 4 xúc tu nhọn hoắt, mỗi xúc tu có một con mắt nhưng bị mù chỉ nghe thấy âm thanh mà định vị, có thể đánh lạc hướng bằng tiếng động lớn.IchthyosaurLà con cá khổng lồ có cái đầu phình to, răng nanh và móng vuốt rất lớn ở cuối cánh tay chứ không phải là vây.LeechLà con cá nhỏ, giống với lươn, sống ở dưới nước.SnarkLà một con bọ rất nhỏ, bạn có thể lấy nó làm vũ khí.Khi ném con bọ này ra nó sẽ chạy đến cắn người gần nó nhất, thậm chí cả bạn cũng sẽ bị nó cắn.PenguinLà một con chim cánh cụt gắn quả Mk 2 Grenade sau lưng. Bạn cũng có thể lấy nó làm vũ khí. Khi ném nó ra thì nó sẽ tấn công vật sống, thậm chí cả bạn nữa. Khi bị bắn trúng, quả Mk 2 Grenade trên lưng nó sẽ phát nổ có lượng sát thương trung bình. Đứng gần sẽ nổ cao hơn.

Quái vật từ Race X

Gene Worm

Là một con sâu khổng lồ, boss cuối của game. Điểm yếu của nó nằm ở 2 mắt, khi bắn mù 2 mắt nó sẽ lộ thêm điểm yếu dưới bụng, bắn vào đó sẽ nhanh kết liễu nó. Bị Shephard giết. Có khả năng phun chất độc và triệu hồi các sinh vật Race X khác.

Pit Drone

Hình dáng khá giống với hound eye, có 2 tay và có khả năng bắn "đinh" độc.

Pit Worm

Giống với Tentacle nhưng là một con sâu lớn, có 1 mắt với khả năng bắn ra tia laser. Tiếng kêu của nó rất to.

Shock Trooper 

Khả năng giống Vortigaunt, có thể bắn điện và bắn ra bom sinh học gây độc. Có 1 mắt ở giữa. Khi chết rơi ra Shock Roach.

Voltigores 

Hình dáng khá lớn, có thể phóng ra điện, khi chết xác sẽ tự phát nổ.

Shock Roach

Sinh vật ký sinh trên Shock Trooper (khá giống với hive hand) có thể bắt và sử dụng làm vũ khí (chỉ lần đầu gặp).